Гемоглобин крови, находящийся в следах, со временем претерпевает изменения - стареет. В частности, он в несколько этапов превращается из оксигемоглобина в гематопорфирим. Каждая из форм гемоглобина имеет собственный спектр поглощения, на основе изучения этих спектров устанавливается этап превращения гемоглобина, а следовательно и примерная давность образования следа крови. Конечно, внешние условия сохранения следов крови, исходное состояние самой крови и следонесущая поверхность оказывают влияние на процесс изменения гемоглобина, поэтому, установление давности образования пятна возможно лишь ориентировочно. Для целей установления давности следов крови предложены методики на основе определения активности ферментов крови. Активность некоторых ферментов иногда проявляется на протяжении 80-100 дней. Однако эти методики, как и большинство других биохимических методов, сложны в исполнении и зависимы от многих факторов, что снижает возможности их использования.